Thèses de doctorat
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Item Contribution à l’étude des fonctions déterminées par l’ORF8 du T-DNA du plasmide Ri2659 d’Agrobacterium rhizogenes(2004) OUARTSI AkilaAgrobacterium rhizogenes, bactérie de la rhizosphère est l’agent causal du hairy root qui affecte de nombreuses plantes dicotylédones. Des trois souches les mieux connues d’A. rhizogenes (A4, 8196 et 2659), la plus étudiée est la souche A4. La plupart des données proviennent de l’étude de son plasmide pathogène pRiA4 et de ses fonctions. Les plasmides les moins étudiés, pRi8196 et pRi2659, montrent certaines différences quant à leur organisation génétique comparés à pRiA4. Chez la plupart des espèces de plantes testées les gènes rolA, rolB, rolC (ORF10, 11 12) du T-DNA des différents plasmides Ri sont suffisants pour induire la prolifération de racines. Cependant, les séquences les mieux conservées ne sont pas les gènes rol mais les ORFs 8, 13 et 14. Dans ce travail, nous nous sommes intéressés au gène ORF8 de pRi2659. L’étude des comparaisons de séquences suggère que le produit du gène ORF8 pourrait être impliqué dans des effets liés à l’auxine car il présente certaines similitudes significatives avec : (i) la protéine Tms1 codée par le gène tms1 du T DNA d’A. tumefaciens, responsable de la synthèse de l’indole-3-acétamide (IAM), un précurseur de l’auxine; (ii) le produit du gène rolB d’A. rhizogenes ; et (iii) la protéine prédite codée par le gène 5 du T-DNA d’A. tumefaciens qui convertit le tryptophane en acide indole 3-lactique (AIL), un analogue de l’auxine. Nous avons analysé les réponses aux hormones des plantes et tissus de tabac transgéniques exprimant l’ORF8 de pRi2659 sous le contrôle du promoteur 35S du virus de la mosaïque du chou-fleur (CaMV). Nous avons trouvé que les plantules exprimant le 35S-ORF8 sont résistantes à des concentrations d’auxine qui inhibent la germination et la croissance des plantules sauvages. De plus, la réponse de l’induction racinaire par l’auxine de disques foliaires transgéniques était plus faible comparée à celle du contrôle. Les cotylédons des plantules transgéniques montrent une forme étroite et lancéolée. En outre, les cotylédons et les feuilles transgéniques accumulent d’importantes quantités d’amidon, mais les plantes de tabac adultes exprimant l’ORF8 ne sont affectées ni dans leur croissance ni dans leur morphologie. La fusion du promoteur de l’ORF8 avec le gène uidA, codant la β–glucuronidase (GUS), révèle que la transcription de l’ORF8 est induite par l’auxine. Les séquences du promoteur de l’ORF8 de pRi2659 possèdent des motifs correspondants aux gènes de plantes régulés par l’auxine et se distinguent par la présence d’une séquence reconnue par RAV1 (protéine fixant l’ADN), séquence retrouvée dans certaines régions promotrices de gènes codant des protéines qui fixent l’auxine. La protéine putative ORF8 de pRi2659 possède dans son domaine C-terminal un site de fixation du FAD, caractéristique des tryptophane-2 monooxygénases (T2M).Item Synthèse des IgE et Asthme allergique : Aspects moléculaires et rôle de l’IL-27 & Etude clinicobiologique dans une population pédiatrique asthmatique à Annaba(2007) AMEL BOUMENDJEL MESSARAHDans ce travail de recherche, nous abordons la synthèse des IgE à travers deux aspects essentiels : -un aspect fondamental qui, tout en étant basé sur l’utilisation de la cytométrie en flux, des méthodes de tri cellulaire et des techniques de biologie moléculaire, aborde les mécanismes de la commutation isotypique et le rôle de l’IL-27 dans les lymphocytes B humains en culture; -et un aspect appliqué qui, ayant été réalisé sur des prélèvements sanguins chez une population de soixante-quinze (75) enfants asthmatiques de Annaba (Algérie), est basé sur diverses méthodes d’immunoanalyse. Dans ce contexte, nous avons mis notamment en évidence l’expression d’un récepteur fonctionnel de l’IL-27, comprenant les sous unités TCCR et gp130 sur les cellules B naïves du sang de cordon humain. Cependant, nous relevons le fit que leur expression est faible par rapport aux cellules B spléniques naïves et mémoires. Puis, nous avons montré que cette cytokine augmente la production d’IgE induite par l’IL-4 par les cellules B naïves stimulées avec l’anti-CD40 sans pour autant avoir d’effet sur l’induction de l’activité du promoteur du germline Cε. Cette cytokine favorise la commutation isotypiqe et la différenciation des cellules B naïves en plasmocytes et induit la production des IgG1 par les cellules naïves de la rate CD19+CD27-IgD+IgG- et les cellules B du sang de cordon, activées par l'intermédiaire de CD40. Toutefois, ces effets restent modestes par rapport à ceux de l’IL-10 et l’IL-21 et régulent exclusivement la production d'IgG1. Enfin, l’étude clinicobiologique a démontré la fréquence (75%) de l’atopie (capacité génétique à synthétiser des IgE vis-à-vis des antigènes de l’environnement) et des sensibilisations (surtout allergènes liés à l’habitat) dans cette population. Le dosage des IgEs paraît être un bon marqueur biologique de la sensibilisation dans cette population dans laquelle les pneumallergènes constituent des facteurs environnementaux très souvent impliqués dans la genèse des crises d’asthme et leur sévérité. Quant aux sensibilisations alimentaires, moins fréquentes (9/75) et toujours associées à des IgEs aux acariens, elles semblent correspondre plus à une polysensibilisation qu’à une vraie allergie alimentaire. L’intérêt de l’ECP, marqueur d’activation des éosinophiles, dans l’évaluation de la sévérité de l’asthme et du degré de sensibilisation allergénique a ainsi été mis en évidenceItem Isolement, culture et évaluation de la toxicité des efflorescences à Microcystis sp., du barrage Mexa (El-Tarf)(2008) SAOUDI AmelNotre étude a porté sur la recherche et l’identification des cyanobactéries potentiellement toxiques contaminants les eaux du barrage Mexa (EL-Tarf) et sur l’étude des paramètres physico-chimiques et biologiques susceptibles de provoquer et /ou de contrôler le développement des cyanobactéries. Les microcystines (hépathotoxines) ont été également dosées. Le barrage Mexa a été échantillonné mensuellement pour la première fois, du 14 mars au 28 décembre 2007 soit une période de 10 mois, au niveau de trois stations. Les résultats des paramètres physico-chimiques montrent une température moyenne de 15° C ; un pH alcalin de 8 et une carence en fer lors des efflorescences cyanobactériennes. Les concentrations de nitrates et d’orthophosphates en période de blooms ont atteint les valeurs de 2.20 mg/l et 0.07 mg/l respectivement. Les teneurs en chlorophylle (a) relevées sont en concordance avec les densités des cyanobactéries recensées. L’étude taxonomique nous a permis d’identifier 8 genres appartenant à 2 sous–groupes Chroococcales et Oscillatoriales représenté par les genres : Microcystis sp. ; Chroococcus sp. ; Merismopedia sp. ; Planktothrix sp. ; Oscillatoria sp. ; Lyngbya sp. ; Pseudanabaena sp., ; Spirulina sp. Cinq d’entre eux sont reconnus comme toxiques: Microcystis sp.; Planktothrix sp.; Lyngbya sp.; Pseudanabaena sp.;Oscillatoria sp. L’étude de la distribution spatio-temporelle des cyanobactéries révèle que les densités les plus élevées sont enregistrées au mois de juillet, août, novembre et décembre au niveau de la station 02. Le genre Microcystis sp., est présent durant toute la période d’étude est dominant au mois de novembre avec une densité de 2101316 cellules/ml dans la station 02. Le dosage des microcystines intracellulaires déterminé par le test ELISA a montré des valeurs n’excédant pas 0.77 µg/l en période de booms. Parallèlement, la culture de tous les échantillons a été menée au laboratoire. Les cultures du genre Microcystis sp. et Lyngbya sp., ont montré un bon développement sur milieu BG11 solide , mais seul le genre Microcystis sp., a pu être maintenu sur milieu BG11 liquide après 8 mois de culture. L’observation microscopique de ces cultures a révélé la présence de deux morphoespèces de Microcystis spp., différentes par leur taille cellulaire.Item Isolement, caractérisation et purification de bactériocines produites par des bactéries lactiques autochtones: études physiologiques et biochimiques(2009) MECHAI AbdelbassetLes bactéries lactiques jouent un rôle de premier plan dans la fabrication de produits alimentaires fermentés. Elles contribuent à l'amélioration du goût, de l'aspect et de l'innocuité microbiologique de l'aliment. Ces bactéries produisent en effet une variété de composés à action antimicrobienne tels les acides organiques, le peroxyde d'hydrogène, le diacétyl et les bactériocines. Dans le présent travail, une collection de souches lactiques a été établie, elle comprend 132 souches isolées à partir 48 échantillons de lait fermentés de façon artisanale et identifiées sur la base d’un certain nombre de caractères morphologiques, physiologiques et biochimiques. La recherche de l’antagonisme bactérien dans le milieu solide a été réalisée suivant la méthode de double couche et la diffusion en puits dans des conditions qui éliminent l’effet de l’acide lactique et du peroxyde d’hydrogène. Parmi les 132 souches testées pour leurs activités antimicrobiennes, 92 sont confirmées productrices de bactériocines. Les résultats montrent que les souches productrices de bactériocines sont fréquemment isolées des produits laitiers. A partir de la collection des bactéries isolées, 5 souches appartenant aux espèces, Lactobacillus. curvatus LB65, Lb. brevis LB93, Lb. plantarum JB44, Lactococcus. lactis subsp. lactis RB22, et Lactococcus. lactis subsp. lactis JB31, ont été sélectionnées. Les bactériocines produites par les souches sélectionnées notamment (Lactobacillus. curvatus LB65, Lb. brevis LB93, Lb. plantarum JB44) possèdent de larges spectres d’activité avec un effet bactéricide et sont thermorésistantes et stables dans une large gamme de pH. Il a par ailleurs été démontré que la souche Lactobacillus. curvatus LB65, produit une bactériocine dénommée curvaticine LB65. La procédure de purification de la curvaticine LB65 comporte une filtration du surnageant de culture de la souche productrice, suivie d'une précipitation au sulfate d'ammonium suivie d’une étape de chromatographie sur résine de QAE sephadex A-25 et une HPLC sur échangeur anionique DEAE . Le poids moléculaire de la bactériocine a été estimé à 3,2 KDa par l’électrophorèse en SDS-PAGE et la nature protéique de la bactériocine concentrée a été confirmée par la perte de son activité à la suite d'un traitement aux protéases, elle est également thermorésistant (121°C, 10min) et stable dans une large gamme de pH. Ces caractéristiques confèrent à la curvaticine LB65 un grand intérêt technologique dans le cas de son utilisation dans la biopréservation des aliments.Item Biodégradation des herbicides : cas du fluazifop-p-butyl(2010) MERAH NESMALe fluazifop-p-butyl, qui présente un effet herbicide, est un xénobiotique toxique pour l’environnement. Dans le but de trouver un schéma possible de bioremédiation, cette présente recherche a été menée dans le but de tester, in vitro, sa biodégradation. Le fluazifop- p-butyl a donc été utilisé comme unique source de carbone et d’énergie en présence d’un consortium microbienne prélevé d’un sol longuement traité par cet herbicide. Un système biphasique MBS/huile de silicone a été utilisé durant toute la période d’acclimatation de la biomasse microbienne. L’utilisation de cette phase tampon a pour objectif de lever, d’une part, l’inhibition par excès du xénobiotique et d’autre part, elle a permis d’augmenter sa solubilité dans la phase organique compte tenu de sa très faible solubilité dans l’eau (1 mg /l). Les batchs ont été conduits à 30°C avec une vitesse d’agitation de 190 rpm. La fermentation a été suivie par mesure de la densité optique, la détermination du poids sec et l’évolution du pH du milieu. Le pouvoir émulsifiant ainsi que l’hydrophobicité du consortium sélectionné ont également été étudiés. Les résultats obtenus après une période d’acclimatation du consortium de plusieurs mois (une année) ont révélé par le biais des mesures de DO, les mesures du poids sec, une forte adaptation de celui-ci au fluazifop-p-butyl, utilisé comme unique source de carbone et d’énergie. L’utilisation du système biphasique a permis, non seulement de lever l’inhibition due au substrat, mais il a également permis une meilleure assimilation du xénobiotique comparée à celle obtenu en système monophasique (milieu minéral). L’étude microbiologique a permis d’identifier une seule souche capable d’utiliser l’herbicide comme unique source de carbone. Il s’agit de l’espèce Aeromonas hydrophila. Cette souche bactérienne exhibe une forte hydrophobicité ainsi qu’un pouvoir émulsifiant vis-à-vis du xénobiotique. Les conditions expérimentales utilisées au cours de cette étude ont permis, une fois de plus, de révéler l’efficacité de la phase organique dans la biodégradation du fluazifop-p-butyl et ceci en réduisant la période d’acclimatation du consortium sélectionné.Item L’EPIDEMIOLOGIE DES INFECTIONS DES ELEVAGES DE POULES PONDEUSES DES REGIONS D’ANNABA ET EL-TARF PAR LES SALMONELLES : Sous-typage moléculaire et Mécanismes de résistance aux antibiotiques des souches isolées(2013) BOUZIDI NardjessUne étude épidémiologique préliminaire a été conduite de mars 2008 à novembre 2009 dans 18 élevages de poules pondeuses d’œufs de consommation, situés dans deux régions voisines d’Annaba et Eltarf (Algérie). Pour cela, les 18 bâtiments ont été échantillonnés une à 3 fois tout au long de la bande ; la 1ère visite avait lieu en début de bande (22-31 semaines d’âge des pondeuses), la 2ème visite s’est déroulée entre 47-60 semaines, et la dernière visite s’est faite juste avant la dépopulation, entre 70-86 semaines. Le statut salmonellique des troupeaux a été déterminé en analysant les 2754 prélèvements environnementaux recueillis. Huit élevages se sont révélés positifs à Salmonella spp, avec une fréquence plus élevée en fin de bande comparée au début et au milieu de la bande. Seulement 19 isolats ont été récupérés parmi les 2754 prélèvements analysés, et 9 différents sérovars identifiés. Treize isolats étaient résistants à au moins un agent antimicrobien. Parmi eux, six étaient résistants à au moins trois différentes classes d'antimicrobiens. Les isolats de Salmonella Kentucky étaient résistants aux fluoroquinolones avec une CMIcipro ≥ 8 mg/L. A partir des questionnaires d’enquêtes, l’analyse statistique a permis d’identifier six indicateurs de risque potentiellement liés au statut salmonellique des bâtiments. Une caractérisation génotypique des souches isolées d’élevages, et de celles recueillies de cas humains durant les 2 années a été réalisée. Les souches ont ainsi généré 21 pulsotype en PFGE, 13 profils en IS PCR, et 12 profils en ERIC-PCR. Ces 3 méthodes ont démontré d’un coté, le caractère clonal de certains serovars notamment humains confortant ainsi l’hypothèse d’une diffusion clonale dans ces régions, et d’un autre coté, l’hétérogénéité des profils d’autres sérotypes laissant ainsi supposer une possible diversité des sources de contamination dans ces deux régions. En parallèle, parmi les souches humaines recueillies, nous avons identifié les gènes de résistance aux β-lactamines, et aux aminosides. Le gène BLSE type CTX-M était présent chez 50 souches, dont 35 portaient également une pénicillinase type TEM. Une céphalosporinases type CMY a été également identifiée chez 50 souches de Salmonella. Enfin, le gène armA a été identifié chez 18 souches BLSE type CTX-M, conférant un haut niveau de résistance à la gentamicine, kanamycine et une variabilité de résistance à la streptomycine.Item Antibio-résistance des bacilles à Gram négatif non fermentants isolés au niveau des services de réanimation - CHU Annaba(2013) Meriem TOUATILa résistance aux antibiotiques chez les bacilles à Gram négatif non fermentants est un problème de santé majeur dans les services de réanimation, et particulièrement la résistance aux carbapénèmes. Cette résistance est un problème récent et croissant dans de nombreux pays à travers le monde. Le but de notre travail a été d’étudier la résistance aux antibiotiques et leurs supports génétique sur une série de 64 souches, collectées de Novembre 2010 à Septembre 2011 dans les services de réanimation du CHU d’ Annaba, Algérie. L’identification des souches a été effectuée selon deux techniques : Api20NE et MALDI-TOF MS. L'antibiogramme a été réalisé par méthode de diffusion d’antibiotique sur gélose et les concentrations minimales inhibitrices par Etest. Les mécanismes de résistances aux antibiotiques ont été identifiés par techniques de biologie moléculaire (PCR, séquençage) et on a utilisé l’Ultraflex (MALDI-TOF) pour la détection rapide des carbapénèmases. Parmi les 64 souches isolés (30 A. baumannii et 34 P. aeruginosa), 24 souches A. baumannii et 17 souches P. aeruginosa ont été résistantes à l’imipénème avec des MICS élevées (12 à > 32 µg/ml). Parmi les A. baumannii, 22 possèdent une carbapénèmase de type oxacillinase blaOXA 23, un isolat possède blaOXA-58 et un autre isolat possède les deux gènes au même temps. Et pour les BLSE, 13 possèdent le gène TEM-128. Concernant, les souches de P. aeruginosa, 14 portes le gène blaVIM-2, pour la première fois rapporté en Algérie, et positif au test de synergie EDTA- imipénème. Ces souches affiche nouvelle cassette d’intégron classe I portant le gène VIM-2 et comprend également le gène aadB et aacA4. Pour les BLSE seule trois souches étaient positifs au gène SHV-2. On rapport une prévalence élevée de la résistance aux antibiotiques et particulièrement aux carbapénèmes. Ces résultats soulignent la diffusion des carbapénèmase de type oxacillinase chez A. baumannii, et les métallo-ß-lactamase des chez P. aeruginosa. Ce qui incite la mise en œuvre de politique de surveillance de la résistance aux antibiotiquesItem L’EPIDEMIOLOGIE DES INFECTIONS DES ELEVAGES DE POULES PONDEUSES DES REGIONS D’ANNABA ET EL-TARF PAR LES SALMONELLES : Sous-typage moléculaire et Mécanismes de résistance aux antibiotiques des souches isolées.(2013) BOUZIDI NardjessUne étude épidémiologique préliminaire a été conduite de mars 2008 à novembre 2009 dans 18 élevages de poules pondeuses d’œufs de consommation, situés dans deux régions voisines d’Annaba et Eltarf (Algérie). Pour cela, les 18 bâtiments ont été échantillonnés une à 3 fois tout au long de la bande ; la 1ère visite avait lieu en début de bande (22-31 semaines d’âge des pondeuses), la 2ème visite s’est déroulée entre 47-60 semaines, et la dernière visite s’est faite juste avant la dépopulation, entre 70-86 semaines. Le statut salmonellique des troupeaux a été déterminé en analysant les 2754 prélèvements environnementaux recueillis. Huit élevages se sont révélés positifs à Salmonella spp, avec une fréquence plus élevée en fin de bande comparée au début et au milieu de la bande. Seulement 19 isolats ont été récupérés parmi les 2754 prélèvements analysés, et 9 différents sérovars identifiés. Treize isolats étaient résistants à au moins un agent antimicrobien. Parmi eux, six étaient résistants à au moins trois différentes classes d'antimicrobiens. Les isolats de Salmonella Kentucky étaient résistants aux fluoroquinolones avec une CMIcipro ≥ 8 mg/L. A partir des questionnaires d’enquêtes, l’analyse statistique a permis d’identifier six indicateurs de risque potentiellement liés au statut salmonellique des bâtiments. Une caractérisation génotypique des souches isolées d’élevages, et de celles recueillies de cas humains durant les 2 années a été réalisée. Les souches ont ainsi généré 21 pulsotype en PFGE, 13 profils en IS PCR, et 12 profils en ERIC-PCR. Ces 3 méthodes ont démontré d’un coté, le caractère clonal de certains serovars notamment humains confortant ainsi l’hypothèse d’une diffusion clonale dans ces régions, et d’un autre coté, l’hétérogénéité des profils d’autres sérotypes laissant ainsi supposer une possible diversité des sources de contamination dans ces deux régions. En parallèle, parmi les souches humaines recueillies, nous avons identifié les gènes de résistance aux β-lactamines, et aux aminosides. Le gène BLSE type CTX-M était présent chez 50 souches, dont 35 portaient également une pénicillinase type TEM. Une céphalosporinases type CMY a été également identifiée chez 50 souches de Salmonella. Enfin, le gène armA a été identifié chez 18 souches BLSE type CTX-M, conférant un haut niveau de résistance à la gentamicine, kanamycine et une variabilité de résistance à la streptomycine.Item Extraction, identification et détermination des activités biologiques de quelques extraits actifs de plantes spontanées (Ajuga iva, Artemisia herba alba et Marrubium vulgare) de la région de M'Sila, Algérie.(2013) BOUDJELAL AmelLe but de cette étude est de contribuer à la valorisation et la protection de la flore médicinale de la région de M’Sila. Les enquêtes ethnobotaniques auprès des herboristes de la région ont permis d’inventorier 58 plantes spontanées dont la majorité est utilisé comme antidiabétique. Parmi ces espèces, Artemisia herba alba, Ajuga iva et Marrubium vulgare, ont été retenues pour cette étude. L’analyse qualitative et quantitative par LC-UV-vis-DAD-ESI-MS, a permis de constater la richesse des extraits aqueux et méthanoliques en principes actifs, en particulier polyphénols et flavonoïdes dans les extraits de l’Artemisia herba alba et du Marrubium vulgare, alors que l’Ajuga iva pauvre en ces composés, est riche en iridoïdes. L’étude biologique a montré que les extraits des trois espèces possèdent des effets antidiabétique, antioxydants, leishmanicide et antimicrobien avec des différences au niveau de la puissance de ces effets. L’Artemisia herba alba, à la dose de 300 mg/Kg p.c. a entrainé le pourcentage de réduction le plus important de la glycémie (73.88 %) ; le Marrubium vulgare c’est révélé avoir le meilleur effet antioxydant avec une IC50/DPPH de 0.49 mg/ml. Pour les activités leishmanicide, l’IC50 la plus élevée a été obtenue avec le Marrubium vulgare (25 µg/ml) suivi par Artemisia herba alba et Ajuga iva (10 µg/ml) ; alors que pour les activités antimicrobiennes, l’Artemisia herba alba s’est avéré être un bon agent antimicrobien vis-à-vis de Staphylococcus aureus et Candida albicans avec un diamètre d’inhibition de 18 et 15 mm respectivement comparé aux deux autres espèces.Item Contribution à l’étude de l’effet du sélénium sur le mécanisme biochimique chez le diabète expérimental(2014) BOUSSEKINE SAMIRALe stress oxydant joue un rôle prépondérant dans les complications du diabète. En raison de l’hyperglycémie, la glycosylation non enzymatique ou glycation des protéines est augmentée. Des travaux ont déjà mis en évidence la glycation de la glutathion peroxydase (GPx) chez les diabétiques de type 1 ce qui entraine une diminution de l’activité enzymatique. De plus, la diminution du glutathion réduit (GSH) à cause de l’inactivation de l’enzyme glucose -6- phosphate déshydrogénase (G6PDH). Dans ce contexte, notre travail a porté sur l’étude de l’effet du sélénite de sodium sur l’état du stress oxydatif et l’apparition des complications chez le rat diabétique. Il s'agit d'une étude expérimentale menée au laboratoire sur 35 rats mâles de la souche Wistar répartis en cinq lots de sept rats chacun dont le premier lot sert de témoin (TS), le second est un lot traité par injection intra péritonéal du sélénium a raison de 1.89 mg/kg/j (TTSe), les 03 derniers lots sont rendus diabétiques par injection intra péritonéale de 150 mg/kg d'alloxane (dose unique). Un des lots diabétique est traité par injection intra péritonéale d’insuline à 3UI/100 g PC /J, un autre lot diabétique est traité par1.89 mg/kg/j de sélénium par voie intra péritonéale et ceci pendant 21 jours (les deux lots traités par le sélénium ont subi un prétraitement par gavage de 2mg/kg/j pendant 10 jours par le même oligoélément). A partir de l'analyse des résultats, on à observer que les rats diabétiques non traités ont subi une chute significative du poids corporel. L'injection de l'alloxane a provoqué également une perturbation très claire du métabolisme glucidique, lipidique et protéique traduisant par une augmentation du taux sanguin de glucose, du cholestérol total, LDL-c, triglycérides, lipides totaux, bilirubine, urée, créatinine et l’activité enzymatique des transaminases, phosphatase alcaline, et une diminution de la magnésémie, l’insuline, HDL-c, et l’activité de l’α amylase et G6PDH sérique .une diminution de la défense antioxydante ; GSH, GPx et CAT, avec augmentation du taux de MDA et l’activité de la GST dans les tissus (foie, reins, cœur et testicules). L’étude histologique des organes (pancréas, reins foie, testicules) montre une destruction des cellules β des ilôts de langerhans et aucune modification histologique concernant les autres tissus. Le traitement par le sélénium à presque normaliser les paramètres biochimiques étudiés, avec protection du tissu pancréatique des attaques radicalaires provoquées par l’alloxane. Enfin, la présente étude montre que le traitement des rats diabétiques par le sélénium prévient les complications et plus particulièrement les maladies cardiovasculaires induites par l’hyperglycémie.Item Evaluation de la résistance aux antibiotiques des souches de Klebsiella pneumoniae isolées dans les hôpitaux de la ville d’Annaba(2014) Zineb BELBELKlebsiella pneumoniae est un pathogène opportuniste à fort potentiel épidémique fréquemment impliqué dans des infections sévères. L’augmentation et la dissémination de la résistance aux antibiotiques chez les bacilles à Gram négatif, notamment chez K. pneumoniae, représente un problème majeur de santé publique. Cette étude a pour objectifs d’évaluer et de caractériser le support génétique de la résistance aux antibiotiques des souches de K. pneumoniae isolées dans les différents services hospitaliers du CHU de la ville d’Annaba en 2010 et 2011. D’abord, l’identification de 100 souches de K. pneumoniae a été effectuée par Api 20E et confirmée par spectrométrie de masse (MALDI-TOF-MS). Ensuite, les tests de sensibilité aux antibiotiques (méthode de diffusion de disques sur gélose et CMI par E. Test) ont été réalisés selon les recommandations de la Société Française de Microbiologie. Une recherche phénotypique de la production de β-lactamases à spectre étendu (BLSE) a été également effectuée. Par ailleurs, les gènes de résistance aux antibiotiques ont été caractérisés par les techniques de Biologie Moléculaire (PCR et séquençage). En outre, la transférabilité des déterminants de résistance a été testée par des expériences de conjugaison en utilisant l’E.coli J53 comme souche réceptrice. Enfin, l’étude de la relation clonale entre les souches multi résistantes a été déterminée par la technique Multi-locus Sequence Typing (MLST). Les résultats issus de cette étude ont montré une résistance élevée des souches cliniques de K.pneumoniae à la majorité des antibiotiques cliniquement utilisés particulièrement aux β lactamines ; 80 souches étaient productrices de BLSE avec plusieurs gènes de résistance aux aminosides et aux quinolones, parmi lesquelles 23 souches hébergeaient le gène 16S ARNr méthyltransférase armA ; cela a été rapporté pour la première fois en Algérie. De plus, nous avons pu identifier par MLST un groupe de huit souches appartenant au clone ST39 parmi les 23 souches, qui a été isolé en pédiatrie entre le mois de Février et Juin 2010, ce qui suggère qu’une épidémie nosocomiale avait eu lieu dans ce service. Il convient donc de souligner que l'émergence de tel clone multirésistant qui est à l’origine de l’épidémie est inquiétante car cela a déjà limité les options du traitement de ce type d’infections. En définitive, une politique de surveillance doit être mise en place dans nos hôpitaux afin de limiter l’émergence des carbapénèmases en Algérie.Item Impact du stress oxydatif induit par l’aluminium chez le rat : Exploration des effets protecteurs de l’huile de Nigella sativa et/ou de l’acide lipoïque(2014) BOUASLA IhcèneL’objectif de la présente étude est l’évaluation des effets antioxydants de l’huile de nigelle (Nigella sativa) et/ou de l’acide alpha lipoïque dans la prévention du stress oxydatif induit par le chlorure d’aluminium (AlCl3) chez les rats wistar. Afin de déterminer le pouvoir antioxydant de l’huile de nigelle (Nigella sativa) une étude phytochimique préliminaire a été effectuée, initiée par une analyse quantitative des composés phénoliques suivi par des tests antiradicalaires. Nos résultats ont montré la présence des taux importants en polyphénols, en flavonoïdes et en tanins, Ce qui suggère que l’huile de nigelle (Nigella sativa) contient une teneur élevée en molécules antioxydantes. Ils confirment également que l’huile de nigelle possède un pouvoir contre l’anion superoxyde et le radical DPPH. Notre étude expérimentale a été réalisée sur 36 rats mâles répartis en deux groupes de 18 rats chacun : groupe (A) témoin, groupe (B) traité par l’huile de nigelle (2ml/kg de poids corporel). Après cinq semaines de prétraitement, chaque groupe est subdivisé en trois sous-groupes de six rats chacun: groupe (A1 :T) témoin, groupe (A2 : AlCl3 ) traité par le chlorure d’aluminium (34mg/kg de poids corporel), groupe (A3 : AlCl3+ AAL) traité par le chlorure d’aluminium et l’acide alpha lipoïque (35mg/kg de poids corporel), groupe (B1 : AlCl3+AAL+NS) traité par le chlorure d’aluminium, l’acide alpha lipoïque et l’huile de nigelle, groupe (B2 : AlCl3+NS) traité par le chlorure d’aluminium et l’huile de nigelle, groupe (B3: NS) traité par l’huile de nigelle. Le traitement est poursuivi pendant trois semaines. Nos résultats ont montré que le chlorure d’aluminium a un effet hématotoxique (anémie), hépatotoxique objectivé par une augmentation de l’activité enzymatique des transaminases, phosphatase alkaline, lactate déshydrogénase et la créatine phosphokinase d’une part, et une augmentation de la concentration plasmatique de la bilirubine accompagnée d’une diminution de la concentration plasmatique en protéines totaux et en albumine d’autre part. Nos résultats ont montré aussi que le chlorure d’aluminium a un effet néphrotoxique (augmentation de la concentration plasmatique en urée, en acide urique et en créatinine). Résumé L’administration de chlorure d’aluminium aux rats a provoqué aussi une perturbation du métabolisme lipidique et glucidique (hypercholestérolémie, hypertriglycéridémie et hyperglycémie). De même, il a provoqué un stress oxydatif objectivé par une augmentation des taux de MDA au niveau des organes étudiés (foie, reins, cœur....). Ceci est dû à la génération des radicaux libres oxygénés par ce métal causant une altération histologique (ectasie vasculaire, infiltra inflammatoire lymphoplasmocytaire et œdème). Une diminution du taux de glutathion réduit (GSH) et des activités de quelques enzymes antioxydantes (SOD, CAT, GPx et GSH) plaide en faveur d’un stress oxydatif. Parallèlement, nos résultats révèlent que la supplémentation en huile de nigelle et/ou en acide alpha lipoïque aux rats traités par le chlorure d’aluminium a améliorée les perturbations des paramètres biochimiques, le statut antioxydant et par conséquence atténuer l’intensité du stress oxydatif induit par l’aluminium. Ces résultats confirment que l’exposition au chlorure d’aluminium provoque des effets toxiques et qu’il est possible d’utiliser l’huile de nigelle et/ou l’acide alpha lipoïque dans le but de prévenir contre cette intoxication.Item Etude d’un produit pharmaceutique, médicament générique à usage humain.(2014) OUAZOUAZ MeryemDans cette étude nous avons essayé d’évaluer l’efficacité thérapeutique d’un médicament générique du glimépiride, par rapport au princeps l’Amarel, ainsi que l’effet antidiabétique d’une combinaison d’une plante médicinale, Zygophyllum cornutum Coss, avec ce générique sur des rats diabétiques à l’Alloxane. Certains paramètres biochimiques ont été mesurés. Une étude physicochimique des produits pharmaceutiques ainsi que des tests phytochimiques sur la plante ont été également effectués. Les résultats de l’analyse physicochimique montrent une conformité du générique par rapport au princeps aux normes de la pharmacopée américaine. Le screening phytochimique a révélé la richesse de la plante en Tannins, Saponosides et Flavonoïdes. Les résultats de l’étude biologique montrent une efficacité moindre du générique par rapport au princeps, ce dernier montre un résultat meilleur pour la totalité du bilan sanguin mesuré. La supplémentation du générique avec la plante pourrait posséder un effet anti-hyperglycémiant, car on a observé une baisse non négligeable de la glycémie, avant et après sacrifice, chez les rats diabétiques traités par l’association comparés au lot diabétique témoin et aux lots traités par l’Amarel ou le générique seuls. Une amélioration de tous les paramètres a été également observée chez les rats traités par la combinaison, plus importante que celle obtenue chez les lots qui ont subi une monothérapie. Ces résultats suggèrent que la combinaison du traitement médicamenteux avec la phytothérapie pourrait posséder une efficacité antidiabétique à une dose étudiée.Item Sensibilité aux antibiotiques et profil moléculaire des bactéries responsables d’infections respiratoires basses(2014) RAMOUL AbirLes pneumonies nosocomiales sont la principale cause d'infection nosocomiale dans les unités de soins intensifs, elles sont liées à la ventilation artificielle. Les bactéries responsables d'infections nosocomiales au cours de la ventilation mécanique sont essentiellement les bacilles à Gram négatif (BGN): Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa et les entérobactéries. La résistance aux antibiotiques des BGN est devenue un problème majeur de santé publique. L’objectif de ce travail est d’évaluer le taux, le support génétique de la résistance aux antibiotiques et l’épidémiologie moléculaire d’une série de 95 de souches bactérienne (42 souches d’entérobactéries ,23 d’A. baumannii , 22 P. aeruginosa et 8 S. aureus) responsables de pneumonie isolées dans le laboratoire de microbiologie du centre hospitalo-universitaire, Dr Dorban Annaba, Algérie, entre Janvier 2010 et Octobre 2011, par des techniques phénotypiques et génotypiques. L’identification des souches a été effectuée par Api 20E, Api 20NE, Api Staph et MALDI-TOF Le test de sensibilité aux antibiotiques a été réalisé par la méthode de diffusion de disque su milieu gélosé, les concentrations minimales inhibitrices (CMIs) des souches résistantes ont été déterminées par la technique de dilution en milieu gélosé et E-test. Les gènes codants pour les β-lactamases ont été recherchés par des outils de biologie moléculaire (PCR standard, PCR en temps réel, séquençage). La détermination des relations entre les souches clonales a été réalisée par électrophorèse en champ pulsé (PFGE) après macro restriction par l'enzyme Apa1. Toutes les souches ont montré un haut niveau de résistance à tous les antibiotiques testés principalement aux β-lactamines sauf les P. aeruginosa qui ont présenté un faible taux de résistance aux antibiotiques, les valeurs des concentrations minimales inhibitrices obtenues ont montrés: entérobactéries (Cefotaxime CMI50≥4048 mg/l) et imipeneme CMI50 =128 µg/ml pour A. baumannii. Le séquençage des produits d'amplification de gènes bla a montré la présence du gène CTX-M15 (86,95%), SHV-11(23,80%), SHV-12 (38%), TEM-1 (4,76%) chez nos souches d'entérobactéries ce qui explique le taux élevé de résistances aux β-lactamines. La résistance des A. baumannii aux carbapénemes est liée à la sécrétion de plusieurs carbapénemases essentiellement OXA-23 (60.86%). D’autre carbapénemases ont été trouvées : OXA-24, OXA-58 et NDM-1. La dissémination des CTX-M-15 et OXA-23 dans le service de réanimation est liée à la possibilité de transfert horizontale de ces gènes et la capacité de ces bactéries à acquérir de nouveau gènes. Nos résultats signalent l’urgence de contrôler la diffusion des BMR et la prescription des antibiotiques en ville et à l’hôpital.Item L’apport du sélénium et de la vitamine E dans la toxicité du nickel chez le rat Wistar Albinos(2014) TEBANI MERIEMLa présente recherche a permis d’étudier l’effet toxique du nickel et d'examiner le rôle antioxydant du sélénium et de la vitamine E chez les rats blancs mâles de la souche Wistar Albinos, vue l’impact important de la synergie entre ces deux antioxydants. Nous avons utilisé 70 rats blancs mâles Rattus rattus de la souche Wistar, provenant de l’institut pasteur d’Alger. Agés de 8-9 semaines, d’un poids vif moyen de 270 g. Ils ont été repartis en 7 groupes de 10 rats puis traités pendant 21 jours. Selon nos résultats obtenus, après l’administration du sulfate d nickel à 20 mg/kg de poids corporel par injection intrapéritonéale durant 21 jours, le nickel a provoqué ; un effet néphrotoxique (augmentation de l’urée, la créatinine sériques et l’acide urique), hépatotoxique (augmentation de l’activité enzymatique des transaminases TGO, TGP et de la phosphatase alcaline PAL , une diminution des protéines totales) et hématotoxique (diminution du taux des globules rouges, du concentration d’hémoglobine et le pourcentage de l’hématocrite). D’autre part, le sulfate de nickel exerce également un effet pro‐oxydant, par la diminution ; du taux de glutathion réduit GSH et de l’activité enzymatique de la glutathion peroxydase GPx au niveau du foie, reins, testicules et cerveau, par l’augmentation ; de l’activité enzymatique de la glutathion S‐transférase GST et du taux de MDA (indice de la peroxydation lipidique). Par ailleurs, nous avons obtenu des perturbations de la fonction hépatique en produisant une nécrose hépatique. Les résultats obtenus révèlent également, que la supplémentation de la vitamine E à 15 mg/kg et du sélénium à 10 μg/100g du poids corporel par injection intra péritonéale, chez les rats traités par le nickel, entraînent une amélioration de l’ensemble des paramètres biochimiques, hématologique ainsi que les paramètres du stress oxydant étudiés. En conclusion, le sélénium et la vitamine E sont des antioxydants puissants grâce à leurs effets protecteurs en synergie et ils sont capables de piéger et de neutraliser la plupart des radicaux libres et leurs effets toxiques, et par conséquence, l’atténuation de l’effet toxique du nickel.Item L’effet de la vitamine C et le sélénium sur le développement de diabète chez les rats alimentés par un régime alimentaire carencé en zinc.(2014) FATMI WIDEDCette étude a été réalisée pour étudier l'effet de la vitamine C et de sélénium sur le statut du zinc, le métabolisme des carbohydrates (glucides, lipides, protéines) et de stress oxydatif chez les rats albino (Wistar) diabétiques alimentés par un régime alimentaire pauvre en zinc. Quarante-huit mâles rats diabétiques, divisés en six groupes de huit individus chacun ; le premier groupe a reçu un régime normale (54 mg du zinc/kg de diète) (RN), le deuxième groupe a reçu un régime carencé en zinc (1.2 mg du zinc/kg de diète) (RC), le troisième groupe a reçu un régime normal, traité par une dose quotidienne de la vitamine C (1g/l) dans l'eau de boisson (RN + Vit C), le quatrième groupe a reçu un régime carencé en zinc, traité par une dose quotidienne de la vitamine C (RC + Vit C), le cinquième et le sixième groupes ont reçu respectivement, un régime normal, un régime carencé en zinc, simultanément traités par une dose quotidienne de sélénium par voie orale (0.5 mg/g P.C), (RN + Se et RC + Se). Le poids corporel et la consommation alimentaire sont mesurés régulièrement. Après 27 jours de traitement, les rats sont sacrifiés et quelques paramètres sont déterminés. Selon les résultats obtenus ; la carence en zinc dans l'alimentation a provoqué un déficit pondéral, une diminution de la consommation alimentaire et une diminution de la concentration du zinc dans le sérum et les différents tissus (foie, rein, pancréas et testicule). Ainsi l’insuffisance du zinc a induit une augmentation significative de la concentration sérique du glucose, des lipides totaux, des triglycérides, de l'urée, de la créatinine, de l'acide urique et de la bilirubine totale et directe. Cependant la concentration sérique des protéines totales et d'albumine et le taux du glycogène hépatique sont diminués. De plus, l’activité des transaminases (TGO, TGP) et de l'α-amylase est augmentée, par contre l'activité de l’ALP et LDH sérique est diminuée. En outre, la carence en zinc a augmenté le stress oxydatif qui traduit par une augmentation de la teneur hépatique de malondialdéhyde (MDA) et de l’activité du glutathion-S-transférase (GST), une diminution de taux du glutathion réduit (GSH) hépatique, de l’activité du glutathion peroxydase (GSH-Px) et de l’activité du catalase. Par ailleurs, le traitement par la vitamine C ou le sélénium a rétabli tous les paramètres approximativement à leurs niveaux normaux. Pour conclure, la vitamine C et le sélénium ont probablement joué un rôle clé en tant que puissants facteurs antioxydants contre le stress oxydatif provoqué par la carence en zinc. Par conséquent, ils pourraient être apportés à la réduction du développement de diabète.Item Production, optimisation et étude de xylanases chez une nouvelle souche d’Actinomycète thermophile isolée du compost de poulet(2014) HABERRA SOUMAYALes enzymes xylanolytiques sont des glycosidases (O-glycosidehydrolases, EC 3.2.1.x) qui hydrolysent les liaisons 1,4-D-xylosidiques dans les régions non substituées des chaines de xylanes pour aboutir à des unités simples de xyloses nécessaire au métabolisme cellulaire. Ces xylanases sont fréquemment utilisées dans la formulation d’aliments pour les animaux (amélioration de la digestibilité et de la valeur nutritive), en industries des jus de fruits et brassicoles (amélioration de l’extraction ou la filtration). En industrie du papier, ces enzymes améliorent la pureté de la cellulose, par une réduction de 50 % de la quantité de chlore nécessaire au blanchiment du papier et de la quantité d’organochlorés rejetés dans l’environnement. Ainsi, dans le cadre de la recherche et la production d’enzymes xylanolytiques thermostables chez les microorganismes thermophiles, une nouvelle souche d'Actinomycète thermophile Actinomadura keratinilytica Cpt29 est isolée et identifiée au niveau de notre laboratoire. Les différentes investigations ont montré que cette souche secrète des xylanases extracellulaires dont le niveau d’activité est comparable à d’autres souches connues dans la production de xylanases. L’optimisation de la production de ces xylanases par méthode classique a permis d’augmenter le niveau de production pour atteindre une valeur de 291 %. Par la suite, nous avons procédé à la purification des xylanases pour les caractériser. L’enzyme partiellement purifiée donne deux fractions de taille de 22 KD et 32 KD qui sont au voisinage de la taille recherchée des endoxylanases. L’étude biochimique montre que la xylanase travaille à pH 9 et à température de 75°C en présence de Mn2+. L’étude de la stabilité de xylanase vis à avis du pH et de température élevée montre que la xylanase présente une haute stabilité entre pH 6-9.5 et une bonne thermostabilité à 65 et 70 °C en présence du Mn2+, alors que le Hg2+ inhibent totalement l'activité enzymatique. L’attaque de l’enzyme sur son substrat (Xylane) donne uniquement le monomère de xylose. Ces différents résultats obtenus seraient favorables à l’utilisation de cette enzyme dans le secteur agro-alimentaire et l’industrie du papierItem Purification et caractérisation d’une kératinase thermostable KERAK-29 chez une nouvelle souche d’Actinomycète(2014) HABBECHE AMINADans le cadre de la recherche et la production d’enzymes kératinolytiques thermostables chez les microorganismes thermophiles, une nouvelle souche d'Actinomycète thermophile Cpt29 est isolée à partir du compost de poulet (Nord Est Algérie) et identifiée par des méthodes taxonomiques classiques couplées à la biologie moléculaire en se basant sur le séquençage du gène d’ARNr 16S. L’analyse de la séquence obtenue par alignement a permis de rattacher cette nouvelle souche Cpt29 au genre «Actinomadura» avec 99% de similarité, ainsi l’analyse phylogénique confirme bien l’apparenté de cette souche à l’espèce Actinomadura keratinilytica. La souche thermophile Actinomadura keratinilytica Cpt29 présente une activité kératinolytique de l’ordre de 39.62 UI/ml. Par la suite, nous avons procédé à l’optimisation de la production des kératinases par méthode classique. Après optimisation des conditions de culture de cette souche sur un milieu liquide à base de farine de plumes, nous avons triplé cette activité, soit 135.23 UI/ml. Cette activité reste compétitive par rapport à celles obtenues chez le genre Bacillus et Streptomyces. Dans une autre partie du travail, nous avons purifié la kératinase recherchée et déterminé ses propriétés biochimiques. Ainsi, par techniques d’électrophorèse (PAGE-SDS) et spectroscopie de masse (MADI-TOF/MS), nous avons montré que l'enzyme KERAK-29 est monomérique et présente une masse moléculaire de 29,2331 kDa. Par ailleurs l’analyse de la séquence N-terminal des 25 résidus d’acides aminés de la KERAK-29 : TQADPPSWGLNNIDRQTAFTKATSI présente une grande homologie avec d’autres protéases du genre Streptomyces. L'étude de l'effet de certains inhibiteurs a montré que le PMSF et DFP inhibent totalement l'activité enzymatique ce qui rattache cette enzyme à la famille des protéases à serine. Les optima de pH et température de la KERAK-29 sont respectivement pH 10 et 70°C. L'étude de la stabilité de cette protéase vis à avis du pH alcalin et de température élevée montre que la KERAK-29 présente une haute stabilité entre pH 6-11 et une bonne thermostabilité à 70, 80 et 90°C en présence du Mn2+ . Du point de vue application, cette nouvelle KERAK-29 ayant des caractéristiques biochimiques particulières (alcalinité, thermostabilité élevée et une stabilité importante en présence de détergents) pourrait être utilisée avec succès dans des applications biotechnologiques notamment dans la valorisation des déchets de plumes, le traitement de cuirs, la synthèse des peptides et la détergence.