Caractérisation biochimique d’une pectate Lyase thermostable chez une espèce d’actinomycète thermophile, Actinomadura keratinilytica CPt20, isolée du compost de poulet (région Annaba).
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Date
2018
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Abstract
Dans ce travail de recherche, nous rapportons le criblage d'actinomycètes thermophiles
isolées du compost de poulet produisant des pectinases extracellulaires. Ainsi, les différentes
investigations ont montré que 29 espèces (de Cpt1 à Cpt29) d’actinomycètes thermophiles
secrètent des lyases. Parmi ces espèces, la Cpt20 semble être la plus active par sécrétion
de pectate lyase (Pel-20), a été choisie pour une étude approfondie. L’identification
moléculaire de l’ARNr16S a permis de classer cette espèce comme étant Actinomadura
keratinilytica Cpt20. L’optimisation du milieu de production de la Pel-20 a permis d’avoir
un niveau d’activité de l’ordre de 21101,32 UI/ml. Par la suite cette enzyme a été purifiée
et caractérisée. La Pel-20 s’est révélé un monomère de masse molaire 34 kDa par SDS-PAGE
et 33,12511 kDa par MALDI-TOF/MS. La séquence de l’extrémité NH2-terminale
de la Pel-20 (GFATNQGGTTGGAGGTLS), montre une forte homologie avec la superfamille
des pectate lyases. La Pel-20 a un pH optimum de 10,5 et une température optimale de 70°C.
L’enzyme est inhibée par l'EDTA et activée par le calcium à 1mM ce qui confirme son
appartenance à la superfamille des pectate lyases. Le substrat préférentiel de cette enzyme est
la pectine faiblement estérifiée (32%). La thermoactivité et la thermostabilité de la Pel-20 ont
été améliorées en présence de 1 mM de Ca2 +. Les durées de demi-vie à 70, 80, 90
et 100°C sont respectivement de 18, 12, 7 et 2 h. En conclusion, les propriétés d'alcaliphilicité
et de thermostabilité de Pel-20 ont permis de dire que cette enzyme est un candidat potentiel
pour des applications futures dans les bioprocédés industriels.